As proteinas do endosperma de Coix lacryma-jobi L. var.Adlay : caracterização e comparação com proteinas do endosperma do milho e teosinte

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1989

RESUMO

As proteinas da semente do Coix lacryma-jobi L. var. Adlay foram extraidas e caracterizadas. O endosperma do Adlay contem aproximadamente 21% de proteina. A principal fração proteica do endosperma do Adlay e uma prolamina denominada coixina, cuja porcentagem varia de 10,8% a 77,8%, dependendo da concentração de 2-ME utilizado no solvente de extração. As analises de aminoacidos revelaram que albuminas e globulinas (F1) do endosperma do Adlay são ricas Acido glutamico, Acido aspartico, glicina e alanina. As prolaminas (F2) são ricas em Acido glutamico, alanina, leucina prolina. As prolaminas não são completamente extraidas, mesmo quando 20% de 2-ME e utilizado no solvente de extração, e permanecem como uma contaminação das proteinas residuais (F3), o que faz com que a composição de aminoacidos da F3 seja similar A da F2. Analise das frações proteicas do Adlay atraves de eletroforese em SDS-PAGE demonstrou que a F1 e F3 possuem um padrão bastante complexo de bandas, enquanto que a F2 se subdividiu em apenas cinco bandas de pesos moleculares distintos. Estas cinco bandas foram denominadas de C1, C2, C3, C4 e C5. Anticorpos policlonais foram produzidos contra as bandas de coixina C2 e C3. Os anticorpos contra C2 reagiram com a banda C2 e apresentaram reação cruzada com proteinas de peso molecular mais elevado que o das coixinas e que so foram extraidas quando 20% de 2-ME foram utilizados no solvente de extração. Anticorpos contra C3 reconheceram a banda C3 e apresentaram reação cruzada com uma proteina de 40.5 kDa extraida quando 2-ME era utilizado no solvente de extração.Da analise das coixinas em focalização isoeletrica (IEF) revelou a presença de sete bandas principais. Quando as bandas individuais de IEF foram submetidas a SDS-PAGE, subdividiram-se em mais de uma classe de peso molecular distinto. As bandas de pI 7,26, 6.91, 6,55, 6,34 e 6,20 apresentaram reaçãoo com ambos os antisoros. As proteinas do endosperma do Adlay foram comparadas com as do Zea mays L. var. Maya. Foi constatado que o Maya possui um total de 8,7% de proteina no endosperma, sendo que 51,7% desta proteina são representados por prolaminas que, no caso do milho, são denominadas de zeina. A analise de aminoacidos da Fl, F2 e F3 do Maya revelou que existe uma similaridade na composição de aminoacidos das frações proteicas do Maya e do Adlay. Quando submetidas a SDS-PAGE, a F1 e F3 do Maya apresentaram um complexo padrão de bandas, sendo que algumas das bandas tinham o mesmo peso molecular de bandas encontradas nos padrões de Fl e F3 do Adlay. A F2 do Maya, do mesmo modo que a F2 do Adlay, apresentou uma baixa heterogeneidade em SDS-PAGE. As sete bandas encontradas no padrão de SDS-PAGE do Maya foram denominadas de Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6 e Z7. As prolaminas do Maya não apresentaram reação cruzada com o antisoro contra a classe de coixina C2. Contudo, o antisoro contra C3 apresentou reação cruzada com Z1 e com proteInas de 40,5 e 50 kDa extraIdas na presenCa de 2-ME. Em IEF, a zeina do Maya apresentou oito bandas principais que, quando foram submetidas a SDS-PAGE, revelaram ser principalmente do tipo Z2 e/ou Z3. Apesar da dificil visualização no gel de SDS-PAGE, bandas do tipo Z1 se encontram nos mesmos pis das bandas Z2 e Z3, como foi detectado atraves de analise imunologica com o antisoro contra C3. Os DNAs genomicos do Adlay e do Maya foram digeridos com as enzimas de restrição Eco RI, Bam HI e Hind III e submetidos a hibridizações com as sondas de cDNA da zeina pZ 22,3 e pZ 19,1. Enquanto que o DNA do Maya apresentou homologia com ambas as sondas de zeina, o DNA do Adlay so apresentou homologia com a sonda pZ 22,3. As proteinas do endosperma do Coix lacryma-jobi var. Acre, da linhagem de milho L1038 e dos teosintes Zea mays mexicana e Zea luxurians foram comparadas com as do Adlay e do Maya. Ficou constatado que os padrões de SDS-PAGE da Fl, F2 e F3 do Adlay e do Acre são praticamente iguais. Os padrões de SDS-PAGE da Fl, F2 e F3 dos milhos e teosintes tambem são praticamente iguais. Quando submetida a reações imunologicas, a F2 do Acre apresentou reação cruzada com os antisoros contra as classes de coixina C2 e C3 do Adlay. Da mesma forma que havia sido observado para F2 do Maya, as F2 da L1038, Zea mays mexicana e Zea luxurians nAo apresentaram reação cruzada com o antisoro contra a classe de coixina C2 do Adlay, mas apresentaram reação cruzada com o antisoro contra C3. Da homogeneidade encontrada nos padrões de SDS-PAGE da F2 do Adlay e do Acre e da F2 do Maya, L1038, Zea mays mexicana e Zea luxurians fez com que estas proteinas fossem submetidas a focalização isoeletrica e, subsequentemente, comparadas com os padrões de IEF de prolaminas de outras linhagens de milho e variedades de Coix e teosinte, onde se observou um padrão individual de bandas para cada um dos materiais analisados. Os DNAs genomicos do Zea mays mexicana, Zea luxurians, L1038 foram digeridos com as enzimas de restrição Eco RI e Bam HI e submetidos a hibridizações com as sondas pZ 22,3 e pZ 19,1. Foi constatado que existe homologia entre os DNAs dos milhos e teosintes e ambas as sondas de cDNA da zeina

ASSUNTO(S)

milho plantas - proteinas coix

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