Comparison of different methodologies for DNA extraction from Aegla longirostri

AUTOR(ES)

Bitencourt, João Vitor Trindade, Roratto, Paula Angélica, Bartholomei-Santos, Marlise Ladvocat, Santos, Sandro

FONTE

Brazilian Archives of Biology and Technology

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007-11

RESUMO

Marcadores moleculares são ferramentas úteis para esclarecer dúvidas a respeito dos Aeglidae, único grupo de crustáceos Anomura de água doce. Essas técnicas dependem da obtenção de DNA de boa qualidade e sem contaminantes. O objetivo deste estudo foi comparar algumas metodologias de extração de DNA de Aegla longirostri. Quatorze protocolos foram analisados, baseados na metodologia tradicional de extração de DNA com fenol-clorofórmio, exceto o protocolo K no qual se utilizou um Kit. Os procedimentos diferiram quanto aos tecidos utilizados e a adição de beta-mercaptoetanol ao tampão de lise. Avaliaram-se também diferentes tempos e maneiras de conservação. Indivíduos congelados apresentaram maior degradação do material obtido conforme o tempo em que ficaram congelados. Para os indivíduos conservados em álcool, aqueles mantidos em etanol 95% forneceram material de melhor qualidade. A utilização do Mini Kit resultou em uma quantidade muito pequena de DNA de alto peso molecular. O melhor protocolo para extração de DNA de Aeglidae utilizou músculos e brânquias, de indivíduos frescos com adição de beta-mercaptoetanol ao tampão de lise.

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