Purificação dos diferentes granulos de plaquetas e quantificação do 4-sulfato de condroitina

AUTOR(ES)

Renata Pereira

DATA DE PUBLICAÇÃO

1998

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi obter o isolamento de grânulos de plaquetas, identificar e quantificar a presença do glicosaminoglicano 4-sulfato de condroitina. O fracionamento das plaquetas foi realizado segundo o método de RENDU et al. (1982, 1989). A identificação do 4-sulfato de condroitina foi feita segundo metodologia descrita por NADER et aI. (1987). Após o fracionamento de plaquetas lisadas por gradiente descontínuo de metrizamida, obteve-se uma fração de membranas, o solúvel, uma fração contendo estruturas da plaqueta (grânulos alfa, mitocôndrias e lisossomas, o gradiente e um precipitado contendo os grânulos densos. Através da dosagem de [14C] 5-HT, foi verificada uma maior concentração deste marcador no precipitado, demonstrando que os grânulos densos, que são estruturas captadoras de 5-HT, estavam concentrados nesta fração. Pela dosagem da atividade específica da enzima b3-N-acetilglucosarninidase, poôde-se verificar a concentração desta na fração obtida logo acima do gradiente, indicando, assim, a concentração de lisossomas e de organelas de plaquetas, como mitocôndrias e grânulos a, que possuem densidades próximas nesta fração. Pela identificação de glicosaminogliéanos por eletroforese em gel de agarose, verificou-se a presença significativa do 4-sulfato de condroitina na fração contendo grânulos a, havendo grande quantidade na fração de membranas. Porém, o 4-sulfato de condroitina não foi encontrado nos grânulos densos. Com os resultados obtidos, conclui-se que, conforme sugerido por DONA TO et a!. (1994), o 4-sulfato de condroitina não é estocado nos grânulos densos e, de acordo com o perfil de isolamento, este glicosaminoglicano está presente nos grânulos

ASSUNTO(S)

glicoproteinas proteoglicanos

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