Structure and peroxidase activity of ferric Streptomyces clavuligerus orf10-encoded protein P450CLA: UV-visible, CD, MCD and EPR spectroscopic characterization
AUTOR(ES)
Goto, Leandro S., Hokka, Carlos O., Lima, José F., Prieto, Tatiana, Araújo, Ana Paula U., Nantes, Iseli L., Nascimento, Otaciro R.
FONTE
Journal of the Brazilian Chemical Society
DATA DE PUBLICAÇÃO
2012-05
RESUMO
O presente trabalho reporta a caracterização espectroscópica por absorção UV-visível, dicroísmo circular magnético (MCD) e ressonância paramagnética eletrônica (EPR) da proteína recombinante do tipoP450-canfora (P450CAM) codificada pela orf10 de Streptomyces clavuligerus (P450CLA) expressa por Escherichia coli Rosetta na forma nativa e associada a ligantes externos contendo os grupos β-lactamato, oxazol e derivado de alquilamina (álcool) do ácido clavulâmico. Considerando a diversidade de aplicações da enzima P450, sua reatividade com terc-butil-hidroperóxido (terc-BuOOH) foi caracterizada. O grupo heme da P450CLA apresenta-se covalentemente ligado e exibe características espectrais de UV-visível, CD e MCD de P450CAM, incluindo a banda Soret em 450 nm proveniente do complexo ferroso-CO. P450CLA foi convertido em espécies de valência alta pelo terc-BuOOH e promoveu cisão homolítica da ligação O-O. O perfil radicalar da reação foi terc-butiloxil como radical primário e metil e butilperoxil como radicais secundários. Os radicais metil e butilperoxil resultaram respectivamente da cisão-β do radical alcoxil e da reação do radical metil com oxigênio molecular.
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