Trypanosoma cruzi: Contribuição ao estudo da endocitose dependente e independente de clatrina em formas epimastigotas. / Trypanosoma cruzi: Contribution to the study of the dependent and independent endocytosis of clatrina in epimastigote forms.

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Endocitose em células eucarióticas é o processo de incorporação de macromoléculas por diferentes vias, com diversas proteínas associadas. Este processo ocorre através do brotamento de vesículas na membrana plasmática e endereçamento destas vesículas a compartimentos endossomais no citoplasma. Os tripanossomatídeos são protozoários flagelados patogênicos de grande importância médica e veterinária que apresentam diferentes formas adaptativas ao longo de seu ciclo de vida. Estes parasitas estão estruturalmente organizados dentro de um arcabouço de microtúbulos subpeliculares, o que dificulta invaginações de membrana na maior parte do corpo celular. Entretanto, este arcabouço é descontinuado na região da bolsa flagelar, de onde o flagelo emerge do corpo. Formas epimastigotas do Trypanosoma cruzi apresentam além da bolsa flagelar, uma segunda invaginação de membrana, o citóstoma/citofaringe. Esta estrutura é sustentada por microtúbulos especializados que participam ativamente no processo de endocitose. O objetivo desta tese foi investigar as vias endocíticas presentes nos dois sítios competentes para a captação de nutrientes (bolsa flagelar e citóstoma) de epimastigotas de T. cruzi. Após incubação dos parasitas a 28oC com albumina, transferrina e LDL conjugadas a ouro coloidal e posterior processamento para microscopia eletrônica de transmissão (MET), vesículas endocíticas revestidas contendo albumina foram observadas brotando da bolsa flagelar. Através da análise do conteúdo protéico dos protozoários foi detectada a expressão de clatrina, confirmada por citometria de fluxo e análise in silico da base de dados genômicos do T. cruzi. Por microscopia confocal localizou-se a clatrina na região compreendida entre o núcleo e a bolsa flagelar dos parasitas. Como transferrina foi visualizada em vesículas sem revestimento localizadas majoritariamente no citóstoma, frações de membrana detergente-resistentes foram purificadas por fracionamento celular e o conteúdo lipídico foi analizado por cromatografia, sendo também obtidas as concentrações de proteína e colesterol destas frações de membrana. Dot blots das frações foram positivos para marcadores universais de jangadas de lipídios (flotilina- 1 e toxina B do cólera). Por imunofluorescência co-localizou-se as marcações de transferrina e flotilina no citóstoma. Assim, propomos que a endocitose de transferrina ocorra principalmente pelo citóstoma através de um domínio de membrana detergente-resistente. Epimastigotas foram pré-tratadas com drogas que inibem seletivamente a endocitose mediada por clatrina e por cavéolas, e por drogas que interferem com o citoesqueleto. Estas células foram avaliadas quanto a sua capacidade de captar transferrina do meio. Dados de MET e citometria de fluxo mostraram que a endocitose de transferrina ocorreu normalmente nas amostras onde o brotamento de vesículas mediado por clatrina foi inibido. Por outro lado, nas amostras onde houve inibição da endocitose por cavéolas, a captação de transferrina foi significativamente reduzida. Análise da curva de crescimento de parasitas tratados demonstrou haver relação entre interferência nos domínios de membrana detergente-resistentes e sobrevivência das células. Este conjunto de dados permitiu elaborar um modelo dos mecanismos de endocitose em epimastigotas de T. cruzi.

ASSUNTO(S)

transferrina trypanosoma cruzi trypanosoma cruzi lipídeos da membrana clathrin membrane lipids endocitose células eucarióticas endocytosis transferrin eukaryotic cells clatrina protozoologia de parasitos

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados